Cara Membuat Penimbal Penindasan Imunohistokimia Ini
Phosphate buffered saline (PBS) adalah penyelesaian buffer yang biasa digunakan untuk mengotorkan imunohistokimia (IHC) dan ia sering digunakan dalam penyelidikan biologi. PBS adalah larutan garam berasaskan air yang mengandungi natrium hidrogen fosfat, natrium klorida dan, dalam sesetengah kes, kalium klorida dan kalium dihydrogen fosfat.
Pewarnaan Imunohistokimia
Immunohistochemistry merujuk kepada proses mengesan antigen seperti protein dalam sel-sel seksyen tisu dengan menggunakan prinsip antibodi yang mengikat secara khusus kepada antigen dalam tisu biologi.
Pewarnaan immunofluoresen adalah kaedah pewarnaan immunohistokimia yang pertama.
Antigen dapat dilihat apabila dikaitkan dengan antibodi menggunakan pewarna pendarfluor kerana reaksi mengikat antigen-antibodi Proses ini berlaku apabila ia diaktifkan oleh cahaya yang menarik dari gelombang panjang tertentu di bawah mikroskop fluoresen.
Kepekatan osmolarity dan ion dari penyelesaian sepadan dengan tubuh manusia-mereka adalah isotonik.
Resipi untuk PBS
Anda boleh menyediakan PBS dalam beberapa cara. Terdapat banyak formula. Sebahagian daripada mereka tidak mengandungi kalium, sementara yang lain mengandungi kalsium atau magnesium .
Resipi ini agak mudah. Ia adalah untuk penyelesaian stok 10X PBS (0.1M). Walau bagaimanapun, anda juga boleh membuat larutan saham 1X, atau bermula dengan resipi 10X ini dan cairkannya kepada 1X.
Seluruh proses mengambil masa kira-kira 10 minit.
Pilihan untuk menambah Tween juga disediakan.
Apa yang Anda Perlu Buat Buffer PBS
- Sodium phosphate monobasic (anhydrous)
- Natrium fosfat dibasic (anhydrous)
- Natrium klorida
- Skala dan perahu berat
- Stirrer magnet dan bar kacau
- Penyiasatan pH yang diselaraskan dan sesuai untuk menyesuaikan pH
- Kelalang volumetrik 1L
- Tween 20 (pilihan)
Cara Membuat Saline Buffered Phosphate (PBS)
Timbang 10.9g natrium fosfat dibasic anhydrous (Na2HPO4), 3.2g anhydrous natrium fosfat monobasic (NaH2PO4), dan 90g natrium klorida (NaCl).
Larutkan hanya di bawah air suling 1L.
Laraskan pH hingga 7.4 dan buat penyelesaian sehingga jumlah akhir 1L.
Laraskan 10X sebelum menggunakan dan menyesuaikan semula pH jika perlu.
Anda boleh membuat penyelesaian PBS yang mengandungi 0.5 peratus Tween 20 dengan menambahkan 5mL Tween 20 kepada penyelesaian 1L.
Petua untuk Menjana PBS
Simpan penimbal pada suhu bilik selepas anda membuat penyelesaian PBS.
Reagent bukan anhydrous boleh diganti tetapi anda perlu mengira semula jisim yang sesuai setiap untuk menampung molekul air tambahan.
Penggunaan Phosphate Buffered Saline (PBS)
Salin buffer fosfat mempunyai banyak kegunaan kerana ia isotonik dan bukan toksik kepada kebanyakan sel. Ia boleh digunakan untuk mencairkan bahan dan ia sering digunakan untuk membilas bekas sel. PBS boleh digunakan sebagai pencairan dalam pelbagai kaedah untuk mengeringkan biomolekul kerana molekul air di dalamnya akan tersusun di sekitar bahan-protein, contohnya. Ia akan "dikeringkan" dan dilancarkan ke permukaan yang padat.
PH tetap mantap dan konsisten untuk menghalang pemusnahan sel.
Filem nipis air yang mengikat bahan tersebut menghalang denaturasi atau perubahan konformasi lain. Buffer karbon boleh digunakan untuk tujuan yang sama tetapi kurang berkesan.
PBS juga boleh digunakan untuk mengambil spektrum rujukan apabila mengukur penjerapan protein dalam ellipsometry.