Penampan ini digunakan untuk pemisahan elektroforesis DNA
Penampan TBE amat berguna untuk pemisahan serpihan DNA yang lebih kecil (MW <1000), seperti produk pencernaan enzim sekatan kecil.
TBE mempunyai kapasiti penyerapan yang lebih besar dan akan memberikan penyelesaian yang lebih tajam daripada penampan TAE . Penyangga TAE adalah penyelesaian yang terdiri daripada asas Tris, asid asetik dan EDTA (Tris-asetat-EDTA).
TBE umumnya lebih mahal daripada TAE dan menghalang ligase DNA, yang boleh menyebabkan masalah jika pembersihan DNA seterusnya dan langkah-langkah ligation dimaksudkan. Dengan tiga langkah mudah yang berikut, pelajari cara membuat penyangga TBE. Ia tidak boleh mengambil lebih daripada 30 minit untuk membuat penampan ini. Ini caranya:
Sediakan Penyelesaian Stok EDTA
Larutan asid EDTA (etilenediamine tetraacetic) harus disediakan lebih awal daripada masa. EDTA tidak akan pergi sepenuhnya ke penyelesaian sehingga pH diselaraskan kepada kira-kira 8.0. Untuk penyelesaian stok 500 mililiter 0.5 M EDTA, timbangkan 93.05 gram garam EDTA disodium (FW = 372.2). Kemudian larutkan dalam 400 mililiter air deionized dan laraskan pH dengan NaOH. Selepas itu, laraskan penyelesaian kepada jumlah akhir 500 ml.
Sediakan Penyelesaian Stok TBE
Buat penyelesaian stok TBE dengan tumpuan 54 g Tris base (FW = 121.14) dan 27.5 g asid borik (FW = 61.83) dan larutkan kedua-duanya dalam kira-kira 900 mililiter air berair. Kemudian tambahkan 20 mililiter 0.5 M EDTA (pH 8.0) dan laraskan penyelesaian kepada jumlah terakhir 1 liter.
Penyelesaian ini boleh disimpan pada suhu bilik tetapi mendakan akan membentuk penyelesaian yang lebih lama. Simpan penimbal dalam botol kaca dan buang jika mendakan telah terbentuk.
Sediakan Penyelesaian Kerja TBE
Untuk elektroforesis gel agarose, penimbal TBE boleh digunakan pada kepekatan 0.5x (1:10 pencairan stok pekat). Larutkan larutan stok oleh 10x dalam air berair. Kepekatan larutan akhir ialah 45 mM Tris-borate dan 1 mM EDTA. Penampan kini sedia untuk digunakan dalam menjalankan gel agarose .
Apa yang anda perlukan
Untuk membuat penyangga TBE, anda memerlukan hanya empat bahan. Item yang tersisa dalam senarai ini adalah peralatan. Keempat bahan yang diperlukan ialah EDTA garam disodium, asas Tris, asid borik dan air berair.
Bagi peralatan, anda memerlukan standard pH meter dan penentukuran, sesuai. Di samping itu, anda memerlukan 600-milliliter dan 1500-millilitum beakers atau flasks. Membundarkan keperluan peralatan anda adalah silinder lulus dan bar kacau dan plat stir.
Semak inventori di makmal yang anda akan gunakan untuk memastikan anda mempunyai semua yang anda perlukan sebelum anda memulakan. Tiada yang lebih buruk daripada terpaksa berhenti di tengah-tengah menyediakan penyelesaian kerana anda telah kehabisan bahan yang sesuai.
Jika makmal anda berada di sekolah atau tapak kerja anda, periksa dengan kakitangan yang sesuai untuk melihat bahawa mereka mempunyai semua item dalam stok. Melakukannya boleh menjimatkan masa dan tenaga pada akhirnya.