Bagaimana endonuceleases ini menonjol
Berapa banyak yang anda tahu tentang enzim sekatan? Dapatkan pemahaman yang lebih baik tentang apa yang mereka lakukan dan mengapa mereka penting, dengan kajian ini.
Menentukan Enzim Sekatan
Endonucleases sekatan adalah kelas enzim yang memotong molekul DNA. Setiap enzim mengiktiraf urutan unik nukleotida dalam helai DNA. Susunan tersebut biasanya sekitar 4 hingga 6 pasangan pasang panjang. Susunannya adalah palindromik kerana helai DNA pelengkap mempunyai urutan yang sama hanya dalam arah sebaliknya.
Dalam erti kata lain, kedua-dua helai DNA dipotong di lokasi yang sama.
Di mana Enzim-enzim ini Ditemui
Enzim sekatan didapati dalam pelbagai jenis bakteria di mana peranan biologi mereka adalah untuk mengambil bahagian dalam pertahanan sel. Enzim-enzim ini "mengehadkan" DNA asing (contohnya virus) yang memasuki sel, dengan memusnahkannya. Sel hos mempunyai sistem pengubahsuaian larangan yang methylates DNA sendiri di tapak khusus untuk enzim sekatan masing-masing, dengan itu melindungi dari belahan. Lebih daripada 800 enzim yang diketahui telah mendapati bahawa mengenal pasti lebih daripada 100 urutan nukleotida yang berlainan.
Penggunaan dalam Bioteknologi
Enzim sekatan digunakan dalam bioteknologi untuk memotong DNA menjadi helai yang lebih kecil untuk mengkaji perbezaan panjang fragmen di kalangan individu (sekatan Fragment Length Polymorphism - RFLP). Mereka juga digunakan untuk pengklonan gen.
Teknik RFLP telah digunakan untuk menentukan bahawa individu atau kumpulan individu mempunyai perbezaan tersendiri dalam urutan gen dan corak pembahagian sekatan dalam beberapa bidang genom.
Pengetahuan mengenai bidang-bidang yang unik ini adalah asas untuk cap jari DNA . Setiap kaedah ini bergantung kepada penggunaan elektroforesis gel agarose untuk pemisahan serpihan DNA. Penampan TBE, yang terdiri daripada asas Tris, asid borik, dan EDTA, lazimnya digunakan untuk elektroforesis gel agarose untuk memeriksa produk DNA.
Jenis Enzim Sekatan
Terdapat tiga jenis enzim sekatan yang berlainan. Jenis I memotong DNA pada lokasi rawak sejauh 1000 atau lebih pasang base dari tapak pengiktirafan. Jenis III memotong pada kira-kira 25 pasang asas dari laman web ini. Jenis I dan III memerlukan ATP dan mungkin enzim besar dengan pelbagai sub-unit. Enzim Type II, yang kebanyakannya digunakan dalam bioteknologi, memotong DNA dalam urutan yang diiktiraf tanpa memerlukan ATP dan lebih kecil dan mudah.
Enzim sekatan jenis II dinamakan mengikut spesies bakteria yang mana mereka terpencil. Contohnya, enzim EcoRI diasingkan daripada E. coli . Kebanyakan orang ramai terbiasa dengan wabak E. coli dalam makanan.
Enzim sekatan jenis II boleh menghasilkan dua jenis pemotongan yang berlainan bergantung kepada sama ada mereka memotong kedua-dua helai di pusat urutan pengecaman atau setiap helai lebih dekat ke satu hujung urutan pengiktirafan.
Bekas potongan akan menghasilkan "ujung tumpul" tanpa overhang nukleotida. Yang terakhir menghasilkan "lengket" atau "kohesif" berakhir kerana setiap fragmen yang dihasilkan DNA mempunyai hamparan yang memuji serpihan yang lain. Kedua-duanya berguna dalam genetik molekul untuk membuat DNA dan protein rekombinan .
Bentuk DNA ini menonjol kerana ia dihasilkan oleh ligation (ikatan bersama) dua atau lebih helai yang berbeza yang tidak asalnya dihubungkan bersama.