Asas-asas pembekuan-pengeringan budaya (lyofilization)
Lyophilization, juga dikenali sebagai pengeringan beku, adalah proses yang digunakan untuk memelihara bahan biologi dengan mengeluarkan air dari sampel, yang melibatkan pembekuan pertama sampel dan kemudian mengeringkannya, di bawah vakum, pada suhu yang sangat rendah. Sampel lyophilized mungkin disimpan lebih lama daripada sampel yang tidak dirawat.
Mengapa Lyophilization Digunakan
Lyophilization, atau pengeringan pembekuan kultur bakteria , menstabilkan budaya untuk simpanan jangka panjang sambil meminimumkan kerosakan yang mungkin disebabkan oleh ketat pengeringan sampel.
Banyak mikroorganisma dapat bertahan dengan baik apabila lyophilized dan boleh dengan mudah direhabilitasi dan ditanam dalam media kultur, selepas tempoh masa yang lama dalam penyimpanan.
Lyophilization juga digunakan dalam industri bioteknologi dan bioperubatan untuk memelihara vaksin, sampel darah, protein yang disucikan , dan bahan biologi yang lain.
Prosedur makmal ringkas ini boleh digunakan dengan pengering pembekuan yang tersedia secara komersil untuk memelihara pengumpulan budaya anda.
Proses Lyophilization
Proses lyofilization sebenarnya merupakan aplikasi fenomena fizikal yang dipanggil pemejalwapan: peralihan bahan dari pepejal ke keadaan gas, tanpa terlebih dahulu melalui fasa cair. Semasa lyophilization, air dalam sampel beku dikeluarkan sebagai wap air, tanpa terlebih dahulu mencairkan sampel.
Kesalahan biasa
Salah satu kesilapan yang paling biasa apabila ia membabitkan lyophilization tidak mengetahui titik lebur sampel anda, yang menjadikannya sukar untuk memilih lyophilizer yang betul.
Sampel anda mungkin mencairkan semasa proses. Satu lagi kesilapan yang biasa adalah memikirkan lebih sejuk adalah lebih baik apabila pengeringan beku pada pengering beku jenis rak. Semasa pengeringan utama, anda perlu menetapkan suhu rak tepat di bawah suhu eutektik sampel. Perlu haba yang cukup untuk menggalakkan molekul sampel bergerak - tetapi menghalang lebur.
Kesilapan ketiga menggunakan peralatan yang salah untuk sampel anda. Oleh kerana pengeringan beku digunakan dalam tetapan kumpulan, anda harus tahu perkara berikut sebelum membeli satu:
- Berapa banyak kelembapan yang akan menjadi lyophilized
- Apa sampelnya (dan suhu eutektik)
- Cara betul menggunakan pengering pembekukan
Jika unit tidak digunakan dengan betul, ia boleh merosakkan semua sampel. Yang membawa kita kepada kesilapan yang sama: Tidak mengekalkan pam vakum. Pam mesti dalam perintah kerja yang sangat baik untuk lyophilization untuk berfungsi. Menjalankan pam dengan balast gas terbuka 30 minit sebelum dan selepas proses pembekuan kering akan meningkatkan kehidupan pam. Membuka penyingkiran bahan pelepasan gas balast keluar dari pam untuk mengelakkan kerosakan pada komponen dalaman. Anda perlu menyemak minyak pam yang sering untuk perubahan warna dan zarah, dan menukar minyak yang diperlukan. Perubahan minyak tetap mengekalkan pam menarik pada vakum optimum semasa proses pengeringan kering.
Akhir sekali, mempunyai aksesori pengeringan beku yang salah untuk proses lyofilization anda juga boleh menjadi kesilapan besar. Adakah anda memerlukan sampel stopper di bawah vakum anda? Kemudian ruang berhenti diperlukan. Adakah anda membekukan-pengeringan dalam botol? Kemudian pastikan anda mempunyai ruang pengering dengan pelabuhan.
Dengan mengelakkan kesilapan di atas, anda boleh memberikan penjagaan yang lebih baik untuk pengering dan pam pembekuan anda, dan mempunyai sampel yang lebih baik apabila pengeringan beku anda selesai.
Rujukan
Berita Labconco. "Top 5 kesilapan yang dibuat dalam proses lyofilization." http://www.labconco.com/news/top-5-lyophilization-mistakes