Bagaimana Membekukan-Menghilangkan Budaya Bakteri (Lyophilization)

Lyophilization, atau pengeringan beku, adalah prosedur makmal pendek

Pembekuan beku, juga dikenali sebagai lyophilization atau cryodesiccation, adalah proses mengeluarkan air dari produk selepas ia beku (dan kemudian diletakkan di bawah vakum) yang membolehkan ais berubah daripada pepejal ke wap, tanpa melalui fasa cair. Ais (atau pelarut beku lain) dikeluarkan dari produk melalui proses pemejalwapan dan molekul air terikat dikeluarkan melalui proses desorpsi.

Asas-asas Lyophilization

Salah satu cara terbaik untuk menyimpan bakteria, kulat, yis atau budaya mikroorganisma yang lain untuk jangka masa yang panjang adalah dengan menggunakan proses pembekuan beku. Prosedur makmal ringkas ini boleh dilakukan dengan apa-apa pembekuan hawa pengering yang tersedia secara komersil yang akan memelihara pengumpulan budaya anda. Kerana lyophilization adalah bentuk pengeringan yang paling kompleks dan mahal, prosesnya biasanya terhad kepada bahan yang sensitif dan sensitif haba yang tinggi. Bahan-bahan yang tidak rosak oleh pembekuan biasanya boleh dimansuhkan sehingga penyimpanan yang didinginkan tidak diperlukan.

Proses ini boleh mengambil masa kurang daripada tiga jam, dan selama 24 jam, tidak termasuk masa pertumbuhan budaya.

Proses Langkah Kerentian Lyophilization

1. Pertama, tambahkan budaya semalaman, atau rumput, mikroorganisma pada LB atau lain-lain plat agar nutrien yang sesuai.

2. Seterusnya, sediakan botol kapil steril dengan autoklaf terlebih dahulu, dengan topi (penyumbat getah) diletakkan longgar di atas. Letakkan label kertas yang dicetak dengan pengenalan budaya di dalam tiub sebelum autoklaf. Sebagai alternatif, gunakan tiub dengan topi yang direka untuk kemandulan .

1. Tambah 4 mL lyophilization buffer ke plat. Jika perlu, sel-sel boleh digantung menggunakan batang kaca steril.

2. Sentiasa pindahkan penggantungan budaya ke dalam botol yang disterilkan. Tambah kira-kira 1.5 mL setiap botol. Tutup dengan topi getah.

3. Membekukan penggantungan budaya di dalam botol dengan meletakkan botol dalam peti sejuk -20 darjah Celcius.

1. Setelah kebiasaan dibekukan, sediakan pengering pembekukan dengan menghidupkannya dan membolehkan masa untuk suhu dan keadaan vakum yang sesuai untuk menstabilkan. Lakukan ini mengikut arahan pengeluar untuk jenama pengering beku tertentu yang anda gunakan.

2. Berhati-hati, dan aseptik, letakkan topi vial secara longgar di atas botol, supaya kelembapan dapat melarikan diri semasa proses pengeringan beku, dan letakkan botol ke dalam ruang pengering pembekuan. Sapukan vakum ke ruang mengikut arahan pengeluar.

3. Biarkan masa kebudayaan untuk sepenuhnya lyophilize (kering). Ini mungkin mengambil masa beberapa jam hingga semalam bergantung kepada jumlah setiap sampel dan berapa banyak sampel yang anda ada.

4. Keluarkan sampel dari ruang pengering pembekuan mengikut arahan pengilang dan segera tutup botol dengan topi getah, kemudian bahagian kelim.

5. Simpan koleksi kultur lyophilized pada suhu bilik.

Produk Anda Perlu

• Bekas beku
• Nutrien atau plat agar yang sesuai (dan inkubator untuk mengembangkan budaya)
• Rod kaca
• Penampan Lyophilization
• Vaksin berkilat dengan penyumbat getah (dan crimper untuk memohon topi)
• Freezer

<sub>Rujukan:

SP saintifik. Prinsip Asas Pengeringan Beku. http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/</sub>