Juga dirujuk sebagai Analisis RFLP, teknik mengambil kesempatan daripada polimorfisme dalam kod genetik individu individu. Walaupun semua ahli spesies mempunyai asas genetik yang sama, perbezaan kecil ini menyumbang kepada variasi dalam fenotip, seperti penampilan atau metabolisme, antara individu.
RFLP: Analisis Teknik dan Aplikasi
Teknik analisa RFLP melibatkan pemotongan rantau tertentu DNA dengan variabilitas yang diketahui, dengan enzim sekatan, kemudian memisahkan serpihan DNA dengan elektroforesis gel agarose dan menentukan bilangan serpihan dan saiz relatif.
Enzim sekatan adalah enzim, molekul protein, yang memotong DNA di tapak sekatan. Pada dasarnya, sampel DNA dipecahkan dan dicerna oleh enzim sekatan. Serpihan yang dihasilkan dipisahkan mengikut panjangnya dan corak saiz serpihan akan berbeza untuk setiap individu yang diuji.
Proses RFLP yang penuh memerlukan pelabelan probe, pemecahan DNA, elektroforesis, pemotongan, hibridisasi, pencucian, dan autoradiografi. RFLP yang dikesan divisualisasikan menggunakan filem X-ray dalam autoradiografi, di mana serpihan DNA boleh dilihat dan dianalisis selepas ia dipisahkan antara satu sama lain oleh elektroforesis.
Beberapa aplikasi untuk analisis RFLP termasuk:
- Cap jari DNA . Para saintis forensik boleh menggunakan analisis RFLP untuk mengenal pasti suspek berdasarkan sampel bukti yang dikumpulkan pada adegan jenayah.
- Paternity. RFLP juga digunakan dalam penentuan bapa atau untuk menelusuri keturunan.
- Kepelbagaian genetik. Teknik ini boleh digunakan untuk mengkaji evolusi dan penghijrahan hidupan liar, mengkaji corak pembiakan dalam populasi haiwan dan dalam pengesanan dan diagnosis penyakit-penyakit tertentu.
Teknik penggunaan RFLP pengesanan variasi dalam genom adalah alat penting dalam pemetaan genom dan analisis penyakit genetik. Sekiranya lokasi gen penyakit tertentu sedang dicari dalam kromosom tertentu, maka para penyelidik akan menganalisis DNA anggota keluarga dengan penyakit tersebut, kemudian mencari corak warisan yang sama dalam alel RFLP.
Sebaik sahaja gen penyakit dilokalisasi, menjalankan analisis RFLP pada ahli keluarga lain boleh mendedahkan pembawa gen mutan atau isyarat risiko penyakit secara keseluruhan. Adalah penting untuk diperhatikan bahawa teknik RFLP tidak banyak digunakan sekarang bahawa teknik yang lebih baru, lebih kuat digunakan untuk analisis DNA dalam sains forensik dan beberapa bidang lain.
Aspek Negatif Analisis
Malangnya, teknik analisis RFLP membosankan dan perlahan. Selain daripada memerlukan sejumlah besar sampel DNA - sampel biasanya perlu kira-kira saiz satu perempat, yang agak besar untuk sampel DNA - proses, dari penyelidikan pelabelan ke pencuci dan autoradiografi, boleh mengambil bulan penuh untuk disiapkan.
Hasil dari Projek Genom Manusia cukup banyak menggantikan keperluan RFLP. Projek ini dibenarkan untuk menentukan keseluruhan urutan DNA yang terdapat dalam sel manusia, genom manusia, dan untuk mengenal pasti semua gen dalam genom manusia.