Mengukur Kinetik Enzim
Sebagai latar belakang, enzim adalah protein yang bertindak sebagai pemangkin dalam mengurangkan jumlah tenaga pengaktifan untuk tindak balas yang berlaku. Tenaga pengaktifan adalah tenaga yang diperlukan untuk mendapatkan tindak balas "bermula" kerana banyak tindak balas tidak berlaku dengan sangat cepat (atau berlaku sama sekali) jika mereka mungkin termodinamik.
Enzim memangkinkan tindak balas tertentu di tapak tertentu (dikenali sebagai tapak aktif) di mana reaksi mengikat dan bertindak balas untuk menjana produk. Substrat mempunyai tapak aktif yang khusus hanya untuk mereka supaya tiada bahan lain mengikat atau bertindak balas di laman web yang sama. Seperti kunci dan kekunci, setiap enzim akan memangkinkan hanya satu reaksi tertentu (dengan beberapa pengecualian).
Aktiviti khusus digunakan dalam kaedah pengasingan protein untuk menunjukkan peratusan pembersihan. Adalah penting untuk mengetahui unit ini ketika membeli enzim untuk menunjukkan betapa banyak enzim murni yang anda dapatkan.
Apabila mengukur kinetik enzim (kadar tindak balas enzim dengan substrat - atau permukaan), aktiviti tertentu ditakrifkan sebagai jumlah substrat yang ditukar enzim (tindakbalas catalyzed), per mg protein dalam penyediaan enzim, satu unit masa.
Satu contoh aktiviti tertentu ialah:
- Aktiviti spesifik enzim terpencil diukur pada 150 umol / min / mg protein sebelum pembersihan dan 800 umol / min / mg, selepas pembersihan.
Aktiviti khusus adalah ukuran penting untuk kesucian enzim. Kumpulan yang berbeza daripada enzim tulen harus mempunyai nilai yang sama dan bahkan mencairkan penyelesaian enzim berkali-kali akan mempunyai nilai aktiviti tertentu yang sama walaupun terdapat nilai aktiviti enzim yang berbeza. Ini kerana dalam mengira aktiviti tertentu, pengangka (unit / ml) dan penyebut (mg / ml) terjejas sama.
Aktiviti spesifik sangat berbeza daripada aktiviti, tetapi pengiraan aktiviti khusus masih bergantung pada nilai aktiviti. Ini bermakna nilai aktiviti tertentu yang dinyatakan juga akan bergantung kepada definisi unit enzim.
Kaitan enzim yang mempunyai nilai aktiviti yang lebih rendah daripada yang dijangkakan mungkin mengandungi molekul enzim yang telah diubah atau bercampur dengan kekotoran.
Faktor-faktor yang mempengaruhi Aktiviti Enzim
Adalah mungkin bahawa satu enzim mungkin mempunyai nilai aktiviti yang diukur yang berlainan apabila diukur dalam makmal yang berlainan (iaitu, perbezaan sebenar dalam aktiviti yang diukur, bukan perbezaan jelas yang disebabkan oleh penggunaan definisi unit yang berbeza).
Cara pengujian dilakukan (kaedah pengujian untuk menentukan kesucian enzim) akan mempengaruhi nilai aktiviti yang dilaporkan. Sebagai contoh, enzim biasanya lebih aktif antara suhu 37 darjah Celsius berbanding dengan 20 darjah Celcius, jadi jika ujian dijalankan pada 21 darjah Celsius, nilai-nilai akan berbeza daripada ujian yang dijalankan pada suhu 32 darjah Celsius (biasanya , ujian dilakukan pada suhu antara 20-37 darjah Celcius).
Oleh itu, takrif unit enzim akan lebih baik dinyatakan sebagai 1 unit (U) ialah jumlah enzim yang memangkinkan tindak balas 1 nmol substrat seminit dalam keadaan standard.